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石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别

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发表于 2014-2-19 11:46:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
石蜡切片、冰切片及振切片的区
石蜡切片
   把修好的蜡装在旋切片机上,即可行切片(section)。切片必保持切片刀利,切片厚度通常5~7um,也可根据染色需要切成不同厚度,一般不旋式切片机超10um。切好的蜡,放人40左右的温水中将蜡片展平。良好的切片无刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述问题,在行免疫组织化学染色会出假阳性象。能得到平整无褶的组织切片。可采用两次展片,即先将组织切片漂浮在30%的乙醇溶液中行第一次展片,然后将切片起,再次放人45~50的水浴中行第二次展片,乙醇的度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行整。此程是利用乙醇溶液与水之力差展开切片的褶。防止脱片,玻片要涂黏片HE染色的切片,可在玻片上涂抹薄蛋白甘油,但蛋白甘油因含蛋白易致非特异性免疫反,故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅理。
二、切片
   冰切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法,其最突出的点是能够较完好地保存胞膜表面和胞内多种活性以及抗原的免疫活性,尤其是胞表面抗原更采用冰切片。新鲜组织和已固定的组织均可作冰切片。了得到高量的冰切片,选择好的冰切片机和配套的一次性刀架是保切片量的关 组织在切片前需要冰,而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶,从而影响抗原定位。一般认为,冰晶体大而量少,影响小;冰晶体小而量多对组织结大。含水量多的组织易出冰晶。
   1.防止组织中冰晶形成的方法
   (1)速:使组织温度降,减少冰晶的形成。方法包括:
   1)干冰—丙(乙醇)法:将150~200ml丙(无水乙醇)装入小保温杯内,逐加入干冰,直至和呈黏稠状,再加干冰不再冒泡,温度可达-70,用一小杯内装异戊烷约50ml,将此慢置人干冰—丙(或无水乙醇)和液内,至异戊温度-70即可使用。将组织(大小lcm×0.8cm×0,5cm)投入异戊内速30~60秒后取出,置恒冷箱内以切片,或置-80低温冰箱内存。
   2)液氮法:将组织块平放于塑瓶盖或特制锡纸小盒(直径2cm),可适量加OCT包埋浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮即开始汽化沸,此小盒保持原位,切勿浸入液氮中,大10~20秒后组织即迅速冰。取出冷组织块立即置人恒冷箱切片机冷切片或置人-80冰箱用。
   (2)用蔗糖溶液:将组织置于20%~30%蔗糖溶液l~3天,利用高渗吸收组织中水分,减少组织含水量,可防止或减少冰晶的形成。
   2.恒冷箱切片法
   冷后的组织块即可用于恒冷箱切片,其程包括以下步
   (1)组织包埋根据研究目的取所需组织(如切取小鼠肝1.0cm×l.0cm×0.5cm大小的组织块),用滤纸吸去多余水分,将组织块平放于用特制锡纸小盒(直径2cm)或塑瓶盖内。加适量OCT包埋浸没组织,40浸透20—30分防止冰晶形成,包埋前可行蔗糖理。
   (2)组织:按上述干冰—丙(乙醇)法或液氮法冷冻组织
   (3)切片:切片前1小将恒冷箱切片机的温度-18左右,以切片。切片温度以-15—-18宜,温度组织易破碎。刀的角度要适当?否不易片。用玻片组织切片,勿上下移。未固定的新鲜组织在冰切片后使用相的固定固定10分。冰切片后如不立即染色,必电风扇吹干,存于-70低温冰箱内或行短暂预固定后低温冰箱保存。染色前从冰箱内取出切片,置室温干燥10分,再冷丙固定5~10分(未固定者),PBS漂洗3次后即可入染色程序(HE染色可用甲、冰醋酸和95%乙醇快速固定1—2分)。
   (4)冰切片的保存:冰切片后如不能及染色,可在干燥后装入密封的本盒内,外包塑料袋,存于低温冰箱,或行短暂预固定后于低温冰箱保存。
三、切片
   用切片机(vibratome)可以把新鲜组织(不固定、不冷)切成20~400pm的厚片,以漂浮法在反板内组织化学或免疫组织化学染色。因组织不冷,无冰晶形成也无组织抗原破坏,染色前又避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的害,故能好地保留组织内脂溶性物胞膜抗原。切片主要用于示神抗原分布的研究。于柔的胚胎脑组织,可用低熔点(45—55)10%脂糖包埋,振切片机切成厚片(40—100gm),采用漂浮法在反板内行免疫组织化学染色,激光描共聚焦镜观察。

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 楼主| 发表于 2014-3-11 13:34:06 | 显示全部楼层
楼主对石蜡有什么好的推荐吗?这个好像还不错吧?
http://www.leicabiosystems.com/c ... %E7%9F%B3%E8%9C%A1/
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发表于 2014-4-2 18:34:04 | 显示全部楼层
顶!!!!!!!












一次性温度记录仪
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发表于 2014-9-27 11:14:04 | 显示全部楼层
谢谢楼主分享。
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